Izdelki

Diferenciacija orbitalnih fibroblastov v zrele adipocite in kasnejše kopičenje maščobnega tkiva je bilo dokazano pri napredovanju Gravesove orbitopatije (GO).Avtofagija je vključena v adipogenezo, vendar je malo znanega o vlogi avtofagije pri začetku in napredovanju GO.Namen te študije je raziskati vlogo avtofagije v patogenezi GO. Analizirani so bili eksplantati orbitalnega maščobnega/vezivnega tkiva bolnikov z GO in normalnih oseb ter izolirani orbitalni fibroblasti.Adipogeneza je bila inducirana z diferenciacijskim medijem z ali brez vodikovega peroksida, avtofagija pa je bila manipulirana z uporabo bafilomicina A1 in Atg5-ciljane kratke lasne RNA (shRNA).Avtofagosome smo identificirali z elektronsko mikroskopijo.Izražanje genov, povezanih z avtofagijo, in transkripcijskih faktorjev, povezanih z adipogenezo, so analizirali z verižno reakcijo s polimerazo v realnem času in/ali Western blot analizo.Kopičenje lipidnih kapljic je bilo raziskano z obarvanjem z Oil Red O. Avtofagične vakuole so bile v celicah GO večje kot v celicah brez GO (p<0,05).Izražanje genov, povezanih z avtofagijo, je bilo bistveno večje v tkivih in celicah GO kot v njihovih ne-GO primerkih.Interlevkin-1β je povečal protein LC3-II, p62 in Atg7 v celicah GO.Kopičenje avtofagosoma je bilo prikazano 4. dan adipogeneze in se je zmanjšalo do 10. dne, skupaj s tvorbo lipidnih kapljic.Izražanje proteinov LC3 in p62 se je povečalo v 48 urah po diferenciaciji in postopoma zmanjšalo od 4. do 10. dne. Zdravljenje z bafilomicinom A1 in izločanje Atg5 s shRNA sta zavirala kopičenje lipidnih kapljic in zatrla izražanje adipogenih markerjev. Avtofagija je bila povečana v tkivu in celicah GO v primerjavi z ne-GO tkivo in celice, kar kaže na to, da ima avtofagija vlogo pri patogenezi GO.Manipulacija z avtofagijo je lahko terapevtska tarča za GO.