Izdelki

Izboljšana izraba dušika pri govedu je pomembna za zagotovitev trajnostne govedoreje.Ker purini in pirimidini (PP) predstavljajo znaten del dušika v vampu, je bistveno boljše razumevanje absorpcije in vmesne presnove PP.Pričujoče delo opisuje razvoj in validacijo občutljive in specifične metode za sočasno določanje 20 purinov (adenin, gvanin, gvanozin, inozin, 2'-deoksigvanozin, 2'-deoksiinozin, ksantin, hipoksantin), pirimidinov (citozin, timin, uracil, citidin, uridin, timidin, 2'-deoksiuridin) in produkti njihove razgradnje (sečna kislina, alantoin, β-alanin, β-ureidopropionska kislina, β-aminoizomaslena kislina) v krvni plazmi krav molznic.Tehnika, ki temelji na tekočinski kromatografiji visoke ločljivosti, povezana s tandemsko masno spektrometrijo z ionizacijo z elektrosprejem (LC-MS/MS), je bila združena s posameznimi matrikso usklajenimi umeritvenimi standardi in stabilnimi izotopsko označenimi referenčnimi spojinami.Pred kvantitativno analizo je bil izveden nov postopek predhodne obdelave, ki je sestavljen iz obarjanja etanola, filtracije, izhlapevanja in rekonstitucije.Raziskani so bili parametri za ločevanje in detekcijo med analizo LC-MS/MS.Potrjeno je bilo, da je uporaba logaritemskega kalibracijskega modela namesto linearnega kalibracijskega modela povzročila nižji CV %, pomanjkanje fit testa pa je pokazalo zadovoljivo linearno regresijo.Metoda zajema razpone koncentracij za vsak metabolit glede na tiste v dejanskih vzorcih, npr. gvanin: 0,10–5,0 μmol/L in alantoin: 120–500 μmol/L.CV % za izbrana območja kvantifikacije je bil pod 25 %.Metoda ima dobro ponovljivost (CV%≤25%) in srednjo natančnost (CV%≤25%) ter odlične izkoristke (91-107%).Vsi presnovki so pokazali dobro dolgoročno stabilnost in dobro stabilnost v serijah (CV%≤10%).V plazmi, urinu in mleku so opazili različne stopnje učinkov absolutnega matriksa.Določanje relativnih učinkov matriksa je pokazalo, da je metoda primerna za skoraj vse preiskane presnovke PP v plazmi, odvzeti iz arterije in portalne jetrne, jetrne in gastrovranične vene ter z nekaj izjemami tudi za druge vrste, kot so piščanec, prašič, kune, človek in podgana.