Izdelki

Beta-D-2'-deoksi-2'-fluoro-2'-C-metilcitidin (PSI-6130) je močan specifični zaviralec sinteze RNA virusa hepatitisa C (HCV) v celicah replikona Huh-7.Za zaviranje polimeraze HCV NS5B RNA mora biti PSI-6130 fosforiliran v 5'-trifosfatno obliko.Raziskovali so fosforilacijo PSI-6130 in inhibicijo HCV NS5B.Fosforilacijo PSI-6130 z rekombinantno humano 2'-deoksicitidin kinazo (dCK) in uridin-citidin kinazo 1 (UCK-1) smo izmerili z uporabo sklopljene spektrofotometrične reakcije.Pokazalo se je, da je PSI-6130 substrat za prečiščen dCK s Km 81 mikroM in kcat 0,007 s-1, vendar ni bil substrat za UCK-1.PSI-6130 monofosfat (PSI-6130-MP) je bil učinkovito fosforiliran v difosfat in nato v trifosfat z rekombinantno humano UMP-CMP kinazo oziroma nukleozid difosfat kinazo.Proučevali so inhibicijo divjega tipa in mutiranih (S282T) HCV NS5B RNA polimeraz.Konstanta inhibicije v stanju dinamičnega ravnovesja (Ki) za PSI-61 30 trifosfat (PSI-6130-TP) z encimom divjega tipa je bila 4,3 mikroM.Podobne rezultate smo dobili z 2'-C-metiladenozin trifosfatom (Ki=1,5 mikroM) in 2'-C-metilcitidin trifosfatom (Ki=1,6 mikroM).NS5B z mutacijo S282T, za katero je znano, da daje odpornost na 2'-C-metiladenozin, je zaviral PSI-6130-TP enako učinkovito kot divji tip.Vključitev PSI-6130-MP v RNA, katalizirana s prečiščeno NS5B RNA polimerazo, je povzročila prekinitev verige.