Izdelki

Monogalaktopiranozidi fluoresceina in fluorescein metil estra: sinteza, encimska hidroliza z biotilirano β-galaktozidazo in določitev translacijskega difuzijskega koeficienta

Fluorescein monoglikozidi (d-galaktopiranozid (FMG) in d-glukopiranozid) in njihov metil ester (MFMG) so bili pripravljeni iz acetobromoglukoze/galaktoze in fluorescein metil estra v dobrih izkoristkih.Izvedeni so bili poskusi encimske hidrolize (z uporabo biotinilirane β-galaktozidaze) galakto derivatov in izračunani so bili kinetični parametri.Med hidrolizo so opazili 15–20-kratno povečanje intenzivnosti fluorescence.Pri kratkem času in nizki koncentraciji substrata so opazili linearno povečanje fluorescence, zaradi česar so te spojine uporabne in občutljive sonde za galaktozidaze.Velikost vrednosti Michaelis-Mentenove konstante (Km) za MFMG je višja od vrednosti FMG, kar kaže na možno konformacijsko spremembo fluorogenega substrata.Vrednost Km za biotiniliran β-Gal s FMG je nižja kot vrednost za nativni encim.Ta ugotovitev kaže na večjo afiniteto substrata biotiniliranega encima v primerjavi z nativnim encimom.Koeficienti translacijske difuzije so bili izmerjeni za oba fluorogena substrata in oba produkta z uporabo fluorescenčne korelacijske spektroskopije.Izmerjeno je bilo, da so translacijski difuzijski koeficienti za fluorogene substrate in produkte encimske hidrolize podobni, v območju 3,5–4,5 × 10–10 m2 s–1.Tako izboljšanje ali upočasnitev encimske kinetike zaradi razlike v translacijski mobilnosti substrata in produkta ni tako očitno.