Izdelki

Serin/treonin proteinske fosfataze so bile opisane v številnih patogenih bakterijah kot bistveni encimi, vključeni v od fosforilacije odvisne poti prenosa signala in pogosto povezani z virulentnostjo teh organizmov.Inšpekcija genoma Mycoplasma synoviae je pokazala prisotnost gena (prpC), ki kodira domnevno proteinsko fosfatazo iz poddružine proteinske fosfataze 2C (PP2C).Tukaj poročamo o popolni biokemijski karakterizaciji fosfataze M. synoviae (PrpC) in posebni vlogi kovinskih ionov v razmerju struktura-funkcija tega encima.Analiza aminokislinskega zaporedja PrpC je pokazala, da so vsi ostanki, vključeni v dvojedrni kovinski center in domnevni ostanki, ki koordinirajo tretje kovinske ione, ohranjeni v fosfatazah PP2C, prisotni v PrpC.PrpC je monomerni protein, ki je sposoben defosforilirati fosfo-substrate z odvisnostjo od ionov Mn(2+).Analiza toplotne stabilnosti je pokazala stabilnost encima pri blagih temperaturah in vpliv ionov Mn(2+) na to lastnost.Analiza masne spektrometrije je pokazala, da se trije kovinski ioni vežejo na PrpC, od tega dva z navidezno konstanto visoke afinitete.Mutacijska analiza domnevnih tretjih ostankov, ki koordinirajo kovine, Asp122 in Arg164, je pokazala, da sta ti različici pokazali šibkejšo vezavo manganovih ionov in da sta obe mutaciji vplivali na aktivnost PrpC fosfataze.Glede na te rezultate je PrpC od kovine odvisen član proteinske fosfataze z izboljšano stabilnostjo v holo obliki in z Asp122, ki je verjetno vpleten v tretje mesto vezave kovine, bistvenega pomena za katalitično aktivnost.