Izdelki

Jedrsko kopičenje mutirane oblike jedrnega proteina Lamin-A, imenovanega Progerin (PG) ali Lamin AΔ50, se pojavi pri sindromu Hutchinson-Gilford Progeria (HGPS) ali Progeriji, bolezni pospešenega staranja.Eden od glavnih simptomov te genetske motnje je izguba podkožne maščobe zaradi dramatične lipodistrofije. Stabilno smo inducirali ekspresijo človeškega PG in GFP - zelenega fluorescentnega proteina - kot nadzora v celicah 3T3L1 z uporabo lentivirusnega sistema za preučevanje učinek ekspresije PG na sposobnost diferenciacije te celične linije, enega najpogosteje uporabljenih adipogenih modelov.Za preučevanje učinka kopičenja PG je bila narejena kvantitativna proteomika (iTRAQ).Več moduliranih proteinov je bilo potrjenih z imunoblotingom in PCR v realnem času.Funkcijo mitohondrijev smo analizirali z merjenjem a) bazalne aktivnosti mitohondrijev, b) produkcije superoksidnih anionov in c) individualne učinkovitosti različnih kompleksov dihalne verige. Ugotovili smo, da čezmerna ekspresija PG z lentiviralnim prenosom genov povzroči zmanjšanje stopnje proliferacije in napak v adipogeni zmogljivosti v primerjavi s kontrolo.Kvantitativna proteomska analiza je pokazala, da je 181 proteinov značilno (p<0,05) moduliranih v preadipocitih, ki izražajo PG.Funkcija mitohondrijev je oslabljena v celicah, ki izražajo PG.Natančneje, zaznali smo povečanje aktivnosti kompleksa I in prekomerno proizvodnjo superoksidnega aniona.Inkubacija z lovilci reaktivnih kisikovih vrst (ROS) povzroči zmanjšanje avtofagne proteolize, kot je razvidno iz razmerja LC3-II/LC3-I. Izražanje PG v celicah 3T3L1 spodbuja spremembe v več bioloških procesih, vključno s strukturo citoskeleta, presnovo lipidov, kalcijem regulacijo, prevajanje, zvijanje beljakovin in proizvodnjo energije v mitohondrijih.Naši podatki krepijo prispevek kopičenja ROS k fenotipu prezgodnjega staranja in vzpostavljajo povezavo med mitohondrijsko disfunkcijo in izgubo proteostaze pri HGPS.