Izdelki

Protein ORF45 herpesvirusa, povezanega s Kaposijevim sarkomom (KSHV), je takojšnji zgodnji tegumentni protein, specifičen za gamaherpesvirus.Naše prejšnje študije so razkrile njegovo ključno vlogo v zgodnjih in poznih fazah okužbe s KSHV.V tej študiji smo raziskali interaktom ORF45 z uporabo plošče monoklonskih protiteles.Poleg predhodno identificiranih zunajcelično reguliranih proteinov kinaze (ERK) in p90 ribosomske S6 kinaze (RSK) smo našli več drugih kopurificiranih proteinov, vključno z vidnimi proteini ~38 kDa in ~130 kDa.Masna spektrometrija je pokazala, da je protein 38-kDa virusni ORF33 in protein 130-kDa je celični USP7 (ubikvitin-specifična proteaza 7).Preslikali smo domeno, ki veže ORF33, na visoko ohranjenih 19 aminokislin (aa) karboksilnega konca ORF45 in domeno, ki veže USP7, na prijavljeni konsenzni motiv v osrednji regiji ORF45.Z uporabo imunofluorescenčnega barvanja smo opazili kolokalizacijo ORF45 z ORF33 ali USP7 tako pod transfektiranimi ioni kot v celicah, okuženih s KSHV.Poleg tega smo opazili od ORF45 odvisno relokalizacijo dela ORF33/USP7 iz jedra v citoplazmo.Ugotovili smo, da je ORF45 povzročil povečanje kopičenja beljakovin ORF33, ki je bilo odpravljeno, če je bila v ORF45 izbrisana vezavna domena ORF33 ali USP7.Poleg tega je delecija ohranjenega karboksilnega konca ORF45 v genomu KSHV drastično zmanjšala raven proteina ORF33 v celicah, okuženih s KSHV, in odpravila proizvodnjo virionov potomcev.Skupaj naši rezultati ne razkrivajo samo novih komponent interaktoma ORF45, ampak tudi dokazujejo, da so interakcije med temi proteini ključne za litično replikacijo KSHV. Kaposijev herpesvirus, povezan s sarkomom (KSHV), je povzročitelj več človeških rakov.KSHV ORF45 je večnamenski protein, ki je potreben za litično replikacijo KSHV, vendar natančni mehanizmi, s katerimi ORF45 izvaja svoje kritične funkcije, niso jasni.Naše prejšnje študije so pokazale, da ves protein ORF45 v celicah obstaja v kompleksih z visoko molekulsko maso.Zato smo poskušali opisati interaktom ORF45, da bi zagotovili vpogled v njegove vloge med litično replikacijo.Z uporabo plošče monoklonskih protiteles smo pregledali interaktom ORF45 v celicah, okuženih s KSHV.Identificirali smo dva nova vezavna partnerja ORF45: virusni protein ORF33 in celično ubikvitin-specifično proteazo 7 (USP7).Nadalje dokazujemo, da je interakcija med ORF45 in ORF33 ključna za učinkovito proizvodnjo virusnih delcev KSHV, kar kaže, da lahko ciljna interferenca s to interakcijo predstavlja novo strategijo za zaviranje litične replikacije KSHV.