Izdelki

1. Metode profiliranja metabolitov so pomembna orodja za merjenje zalog metabolitov v bioloških sistemih.Medtem ko večina metod profiliranja metabolitov poroča o relativnih intenzivnostih ali je odvisnih od nekaj notranjih standardov, ki predstavljajo vse metabolite, je končna zahteva za kvantitativni opis bazena metabolitov v bioloških celicah in tekočinah določitev absolutne koncentracije.Tukaj poročamo o visoko zmogljivi in ​​občutljivi metodi profiliranja metabolitov s plinsko kromatografijo/tandemsko masno spektrometrijo (GC/MS/MS), ki omogoča absolutno kvantifikacijo vseh odkritih metabolitov.Metoda temelji na derivatizaciji metil kloroformata in kvantificiranju z vnosom vzorcev s standardi metabolitov, ločeno derivatiziranimi z devteriranimi derivatizacijskimi reagenti.Tradicionalno ionizacijo z elektronskim udarom nadomestimo s pozitivno kemično ionizacijo, saj slednja v veliko večji meri ohrani molekularni ion in druge visokomolekularne fragmente.To je olajšalo izbiro edinstvenih MS/MS prehodov med številnimi soelucijskimi metaboliti.Trenutno nova metoda GC/MS/MS obsega 67 skupnih primarnih metabolitov, od katerih večina pripada skupinam amino in neamino organskih kislin.Uporabnost metode prikažemo na vzorcih urina in seruma.Metoda je pomembna izboljšava sedanje metodologije za kvantitativno profiliranje metabolitov GC/MS aminokislin in neamino organskih kislin.

2,24S-hidroksiholesterol (24OHC) in 27-hidroksiholesterol (27OHC) sta dva strukturno podobna oksisterola različnega izvora – prvi skoraj izključno nastaja v možganih, drugi pa v manjši meri v možganih kot v večini drugih organov.HIPOTEZA, KI JE TREBA PREIZKUSITI: Poškodba nevronov in/ali demielinizacija povzroči povečan pretok 24OHC iz možganov v cerebrospinalno tekočino (CSF), medtem ko okvara krvno-možganske pregrade povzroči povečan pretok 27OHC iz obtoka v cerebrospinalno tekočino. Izotopska dilucija-masa spektrometrija je bila uporabljena za analizo dveh oksisterolov v cerebrospinalni tekočini in plazmi več kot 250 bolnikov z različnimi nevrološkimi in geriatričnimi boleznimi. Na ravni obeh oksisterolov v cerebrospinalni tekočini so različne bolezni veliko bolj vplivale kot na ravni v plazmi.Bolniki z aktivnimi demielinizirajočimi boleznimi so imeli povečane ravni 24OHC v cerebrospinalni tekočini z relativno visokim razmerjem 24OHC/27OHC.Bolniki z meningitisom so imeli na splošno visoke ravni obeh steroidov z nizkim razmerjem 24OHC/27OHC.Bolniki z Alzheimerjevo boleznijo so imeli rahlo povišano raven 24OHC v cerebrospinalni tekočini z manjšim povišanjem 27OHC.Bolniki z multiplo sklerozo so bili nagnjeni k višjim ravnem 24OHC v aktivnih obdobjih z visokim razmerjem 24OHC/27OHC. Meritve obeh oksisterolov v cerebrospinalni tekočini in plazmi lahko znatno prispevajo k obstoječim biokemičnim metodam za vrednotenje nevroloških bolezni.