Izdelki

Za specifično kvantifikacijo več metabolitov 5-fluorouracila (5-FU) in dveh endogenih monofosfatnih nukleotidov smo razvili izvirno metodo, ki temelji na tekočinski kromatografiji–tandemski masni spektrometriji (LC-MS/MS).Ta test je omogočil določitev: (i) znotrajcelične proizvodnje 5-fluoro-2'-deoksiuridin-5'-monofosfata (5-FdUMP) iz 5-FU ali 5-fluoro-2'-deoksiuridina (5-FdUrd) , (ii) vpliv koncentracije 5-FdUMP na znotrajcelično razmerje 2'-deoksiuridin-5'-monofosfat (dUMP)/timidin-5'-monofosfat (TMP) in (iii) obseg izločanja 5-FdUMP in 5-FU iz človeških gojenih celic s transporterji ABC.V naših eksperimentalnih pogojih smo celice inkubirali s 5-FU ali 5-FUrd.Nato so celične beljakovine oborili z metanolom.Ta postopek je zagotovil visoko izkoristek ekstrakcije.Poleg tega smo za merjenje izločanja 5-FU in 5-FdUMP iz celic izvedli kvantifikacijo teh molekul v gojišču.Gojišča so bila bodisi neposredno vbrizgana (5-FU) bodisi pod ekstrakcijo v trdni fazi z uporabo ekstrakcijskega vložka Oasis Wax (5-FdUMP).Ločevanje analitov je bilo izvedeno na koloni dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) z izokratskim načinom z uporabo amonijevega formatnega pufra/metanola/vode (5/5/90, v/v) kot mobilne faze.Čas delovanja ni presegel 6,2 min.Analiti so bili ionizirani v vmesniku elektrospreja v načinu negativnih ionov.Metodo smo validirali v razponu 2,5–150 ng mL -1 glede na spojine.Variabilnost znotraj in med preskusi je bila nižja od 10 % v sedmih dneh.Vse spojine so bile stabilne v celicah ali v gojišču, ko so bili vzorci shranjeni pri –20 °C vsaj dva tedna in po treh ciklih zamrzovanja in odmrzovanja.V obeh medijih niso opazili učinka matriksa.