Izdelki

Patogene molekularne poti pri cirozi jeter, kot so virus hepatitisa C (HCV), avtoimunski hepatitis (AIH) in primarna biliarna ciroza (PBC), so slabo opisane.Diferencialno izraženi geni so pogosto pomembni pri patogenezi bolezni.Supresijska subtraktivna hibridizacija (SSH) je pristop za celoten genom, ki obogati različno izražene transkripte mRNA.Naš cilj je bil narediti nova opazovanja diferencialne genske ekspresije pri cirozi z uporabo SSH v kombinaciji s kvantitativno verižno reakcijo polimeraze z reverzno transkriptazo v realnem času (RT-PCR).Jetrne transkriptome pri cirozi HCV, cirozi AIH, PBC in jetrnem tkivu brez bolezni so pregledali s SSH.Nastale komplementarne DNA (cDNA) klone smo ponovno pregledali za diferencialno izražanje s pikčasto hibridizacijo in nato sekvencirali.Ekspresija izbranega gena je bila kvantificirana z RT-PCR v realnem času.Po SSH je bilo 694 klonov ponovno pregledanih za diferencialno izražanje genov, od katerih je bilo 145 sekvenciranih in ugotovljeno, da izhajajo iz 89 različnih genov.Sedem klonov je bilo homolognih samo z izraženimi sekvencami oznake zaporedja (EST), ki kodirajo gene brez znane funkcije.Povečano izražanje štirih genov je bilo potrjeno z RT-PCR v realnem času: transmembranski 4 naddružinski član 3 (tetraspanin CO-029) pri vseh oblikah ciroze, hedgehog interacting protein (HIP) pri cirozi AIH in hitinaza 3-like-1 (HC gp-39 ali ykl-40) in ponovitev arginin-glutaminske kisline (RERE) pri cirozi HCV.V vseh pregledanih tkivih so opazili polimorfizme gena RERE in variante spoja.Povečana regulacija tetraspanina CO-029 je bila primarno lokalizirana na celicah žolčnih kanalov.Skratka, nova opažanja diferencialne genske ekspresije pri človeški cirozi so bila izvedena z uporabo SSH kot primarnega orodja za odkrivanje.Upravičene so zlasti nadaljnje študije gena RERE in njegovih produktov pri bolezni jeter, povezani s HCV.