Izdelki

Podobno kot drugi virusi RNK s pozitivno verigo se virusi tombus razmnožujejo z membransko vezanim kompleksom virusne replikaze (VRC).VRC je sestavljen iz p92 virusno kodirane RNA-odvisne RNA polimeraze (RdRp), virusnega p33 RNA spremljevalca in več kooptiranih gostiteljskih proteinov.Da bi po prevodu postal funkcionalen RdRp, je treba replikacijski protein p92 vključiti v VRC, čemur sledi njegova aktivacija.Prej smo v testu na osnovi ekstrakta kvasovk brez celic pokazali, da aktivacija RdRp virusa Tomato bushy stunt (TBSV) zahteva topne gostiteljske faktorje.V tem članku identificiramo celični protein toplotnega šoka 70 (Hsp70) kot kooptirani gostiteljski faktor, potreben za aktivacijo N-končno okrnjenega rekombinantnega TBSV RdRp.Poleg tega blokiranje funkcije Hsp70 na osnovi majhnih molekul zavira sintezo RNK s tombusvirusom RdRp in vitro.Poleg tega smo pokazali, da nevtralni fosfolipidi, in sicer fosfatidiletanolamin (PE) in fosfatidilholin (PC), povečajo aktivacijo RdRp in vitro.Nasprotno pa fosfatidilglicerol (PG) kaže močan in prevladujoč zaviralni učinek na in vitro aktivacijo RdRp.Dokazujemo tudi, da PE in PC stimulirata interakcijo RdRp-virusne plus-verige RNA [(+)RNA], medtem ko PG zavira vezavo virusne RNA na RdRp.Na podlagi stimulativne v primerjavi z zaviralno vlogo različnih fosfolipidov pri aktivaciji RdRp virusa tombusa predlagamo, da bi lahko tombusvirusi uporabili lipidno sestavo ciljnih podceličnih membran za uravnavanje novega sestavljanja VRC med potekom okužbe. Od virusa kodirana RNA-odvisna RNA polimeraza (RdRp), ki je odgovoren za sintezo potomcev virusne RNA v okuženih celicah več virusov s pozitivno verigo RNA, je sprva neaktiven.Ta strategija se bo verjetno izognila sintezi virusne RNA v citosolu, ki bi hitro povzročila indukcijo celičnih protivirusnih odzivov, ki jih sproži RNA.Med sestavljanjem membransko vezanega kompleksa replikaze se virusni RdRp aktivira skozi nepopolno razumljen proces, zaradi katerega je RdRp sposoben sinteze RNA.Z uporabo TBSV RdRp smo pokazali, da kooptirani celični spremljevalec Hsp70 in nevtralni fosfolipidi olajšajo aktivacijo RdRp in vitro.Nasprotno pa ima fosfatidilglicerol (PG) prevladujoč zaviralni učinek na in vitro aktivacijo RdRp in interakcijo RdRp-virusna RNA, kar kaže, da membranska mikrodomena, ki obdaja RdRp, močno vpliva na njegovo sposobnost sinteze RNA.Tako je aktivacija virusnega RdRp verjetno odvisna od več gostiteljskih komponent v okuženih celicah.