Izdelki

Membransko topologijo domene kolicinskega kanala E1 smo proučevali s fluorescenčnim resonančnim prenosom energije (FRET).FRET je vključeval genetsko kodirano fluorescentno aminokislino (kumarin) kot darovalca in selektivno označen cisteinski ostanek, povezan z DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) kot akceptorjem FRET.Fluorescentni kumarinski ostanek je bil vključen v protein preko ortogonalnega para sintetaze tRNA/aminoacil-tRNA, ki je omogočil selektivno vključitev v katero koli mesto znotraj domene kolicinskega kanala.Vsaka različica je vsebovala mutacijo stop (TAG) za vključitev kumarina in mutacijo cisteina (TGT) za pritrditev DABMI.Šest medvijačnih razdalj znotraj vijačnic 1-6 je bilo določenih z analizo FRET za topno in membransko vezano stanje.Podatki FRET so pokazali velike spremembe v interhelikalnih razdaljah med vijačnicami 3-6 po povezavi z membrano, kar je omogočilo nov vpogled v membransko vezano strukturo domene kanala.Na splošno se je učinkovitost interhelikalov kumarin-DABMI FRET zmanjšala po vezavi na membrano, kar je gradilo na krovnem modelu za kolicinski kanal.Na podlagi trenutnih in predhodno objavljenih podatkov FRET je bil razvit poskusni model za zaprto stanje domene kanala.Model predlaga krožno razporeditev vijačnic 1-7 v smeri urinega kazalca od zunajcelične strani in membransko medfazno povezavo vijačnic 1, 6, 7 in 10 okoli osrednje transmembranske lasnice, ki jo tvorita vijačnici 8 in 9.