Izdelki

Oksidativne poškodbe baz DNA običajno povzročijo nastanek oksidiranih purinov, zlasti 7,8-dihidro-8-oksoguanina (8-oxoG) in 7,8-dihidro-8-oksoadenina (8-oxoA), pri čemer je prvi dobro znana mutagena lezija.Ker je 8-oxoG zlahka podvržen nadaljnji oksidaciji v primerjavi z običajnimi bazami, je bila in vitro raziskana vstavitev baze med sintezo DNA nasproti oksidirani obliki 8-oxoG.Sintetična predloga, ki je vsebovala eno samo 8-oxoG lezijo, je bila najprej obdelana z različnimi enoelektronskimi oksidanti ali pod pogoji singletnega kisika in nato izpostavljena podaljšku primerja, ki ga katalizira Klenow fragment exo- (Kf exo-), polimeraza alfa telečjega timusa DNA (pol alfa ) ali človeška DNA polimeraza beta (pol beta).V skladu s prejšnjimi poročili sta dAMP in dCMP vstavljena selektivno nasproti 8-oxoG z vsemi tremi DNA polimerazami.Zanimivo je, da je bilo ugotovljeno, da oksidacija 8-oxoG inducira dAMP in dGMP insercijo nasproti lezije s Kf exo- s prehodno inhibicijo podaljška primerja o, ki se pojavi na mestu modificirane baze.Poleg tega lezija predstavlja blokado med sintezo DNK s pol alfa in pol beta.Poskusi z 8-oksoA-modificiranim šablonskim oligonukleotidom kažejo, da tako 8-oksoA kot oksidirana oblika 8-oksoA neposredno vstavita dTMP s Kf exo-.Masna spektrometrična analiza oligonukleotidov, ki vsebujejo 8-oxoG, pred in po oksidaciji z IrCl62-je skladna z oksidacijo predvsem mesta 8-oxoG, kar ima za posledico tvorbo gvanidinohidantoinskega dela kot glavnega produkta.Dokazov za nastanek abazičnih mest ni bilo.Ti rezultati kažejo, da lahko oksidirana oblika 8-oxoG, po možnosti gvanidinohidantoin, povzroči napačno branje in napačno vstavljanje dNTP med sintezo DNA.Če bi se takšen proces zgodil in vivo, bi predstavljal točkovno mutageno lezijo, ki vodi do transverzij G-->T in G-->C.Vendar pa ustrezna oksidirana oblika 8-oksoA kaže predvsem pravilno vstavitev T med sintezo DNA s Kf exo-.